病理科組織脫水、包埋程序及質量控制
時間:2023-11-13 14:16
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組織固定、脫水、透明、浸蠟直至包埋,是制作優(yōu)質切片的關鍵過程。該過程也稱為組織處理。一旦組織處理有欠缺,往往導致無法挽回的后果。
固定后的組織不能直接用蠟滲透,首先要脫去組織中的水分。通常經過一系列的梯度乙醇脫水,如80%→95%→100%。第一步也可使用乙醇和福爾馬林混合液。也可以用其它脫水劑。丙酮脫水非???,但容易燃燒,為了安全,只有在手工處理組織時可少量使用。大多數脫水劑不能與石蠟直接相溶,所以脫水后必須再經過透明劑作用,才能對組織進行浸蠟。最后用石蠟包埋組織塊。
透明劑即可以與脫水劑相溶又能和石蠟相溶。透明劑是脫水和浸蠟的媒介劑,在組織處理中起著橋梁作用,當組織被透明劑浸透后,組織呈透明狀態(tài)。透明劑作用于組織的過程,稱為組織透明。最常用的透明劑是二甲苯。甲苯的作用非常好,組織中剩余少量水分也能使組織透明,但價格比二甲苯貴的多。使用氯仿透明對人的健康有危害。水楊酸甲脂也可以用于組織透明,但很少使用,主要是價格太貴。
組織經過二甲苯透明后,浸泡在熔化的石蠟中,組織浸蠟一般要通過2~3個蠟缸(蠟1、蠟2、蠟3),最終以石蠟替換出組織中的透明劑。石蠟的熔點一般為56~58℃,浸蠟的溫度通常比蠟的熔點高2℃左右。
上述組織處理過程一般由脫水機自動處理(也可手工操作)。組織在脫水機中從一個缸內移到另一個缸內,從一種試劑移到另一種試劑中,完全按照預先設置的時間和溫度程序自動完成。高檔的脫水機是由電腦控制,對試劑的密閉效果好,具有真空和加熱功能,使組織的處理更加完善。
組織處理的質量控制:
1.組織的處理時間,視組織的性質和組織塊的大小而有所不同。致密的組織、富含脂肪或纖維組織,處理所需的時間要比結構細膩、細胞成分多的組織長。最好能根據組織的性質和大小分類,分批進行處理,以便于掌握時間,保證質量。
2.較細小的組織,例如內窺鏡鉗取標本,穿刺標本,應與較大的組織塊分別進行處理。小組織濾紙包裹或者裝入專用的網狀脫水盒內,以免遺失。
3.組織處理所用的各種試劑,可根據工作量的大小,試劑消耗情況定時更換新液。一般情況下一月更換一次。
使用脫水機的參考程序:
程序一:下午下班前運行脫水機。第二天上午8時開始包埋。
時間 試劑
17:00 運行
1 17:45 出 10%中性福爾馬林溶液
2 18:30 出 10%中性福爾馬林溶液
3 20:00 出 80%乙醇
4 21:00 出 90%乙醇
5 23:00 出 95%乙醇
6 24:00 出 95%乙醇
7 1:30 出 100%乙醇
8 3:00 出 100%乙醇
9 3:30 出 二甲苯
10 4:00 出 二甲苯
11 5:30 出 石蠟(54℃)
12 8:00 出 石蠟(58℃)(蠟缸溫度62℃)
程序二:
時間 試劑
16:00運行
1 16:45 出 10%中性福爾馬林溶液
2 17:30 出 10%中性福爾馬林溶液
3 18:00 出 80%乙醇
4 19:30 出 90%乙醇
5 22:00 出 95%乙醇
6 22:30 出 95%乙醇
7 0:30 出 無水乙醇
8 2:30 出 無水乙醇
9 3:00 出 二甲苯
10 3:30 出 二甲苯
11 4:30 出 石蠟 (58℃)
12 5:30 出 石蠟(58℃)
13 7:30 出 石蠟 (58℃)
上述脫水、浸蠟及時間控制程序是經過長期的實際工作總結,并適合免疫組化的質量要求,一年四季的溫度、濕度變化等編制而成的。其中考慮到每種化學試劑的具體作用,特性和取材類型,在實際的工作應用中其效果,原則上滿意,可以保證常規(guī)切片的質量。如今后有工作人員需要對上述脫水、浸蠟時間程序改動,除了要考慮到上述因素之外,先提交申請,申明改動的理由及改進原理,經科主任批準后,可以開始批量試驗。在新程序不成熟以前,不準日常工作應用!待批量結果實驗以后,經全科工作人員對此進行評估,決定應用與否。如違背此規(guī)定,擅自改動者,為第一責任人,出現差錯者應受相應的處分。
工作中自動脫水機使用時的注意事項:
1.按脫水、透明、浸蠟順序設置試劑缸,缸的位置要準確,使標本掛籃升降轉換時準確落入下一級缸內。
2.保持各試劑缸內的試劑液面有足夠的高度,以使組織全部侵入液體內。
3.按設計好的組織處理時間表,調定時間控制裝置。
4.調定浸蠟缸溫度,一般要高出所用石蠟熔點溫度2℃左右。
5.將盛有組織塊的掛籃掛于升降架的掛鉤上,使之落入第一個脫水缸內,啟動機器后開始計時運轉。
6.當完成最后一道程序后,應及時取出標本進行包埋(必要時隨手關機)。